更好用的專業軟件,支持自動生成校準報告 數字PCR(Digital PCR)儀是一種高靈敏度、高精確性的分子生物學實驗儀器,用于檢測和定量DNA或RNA樣本中的特定目標序列。相比傳統的熒光定量PCR(qPCR),數字PCR具有更高的分辨率和準確性,可以在低拷貝數目標的檢測中提供更可靠的結果。
數字PCR儀的工作原理基于PCR反應和稀釋。首先,樣品中的DNA或RNA被提取并反轉錄成cDNA,然后通過PCR反應進行擴增。與傳統PCR不同的是,在數字PCR中,樣品被稀釋成數百到數千個微小的反應區域,使得每個區域中只有一個或少量目標序列。這種分割樣品的方法可以將PCR反應進行數千次擴增,在大量的微小反應區域中獨立地進行擴增,并最終通過計數每個區域中的陽性和陰性信號來確定目標序列的數量。
數字PCR儀通常由以下幾個主要部分組成:
樣品處理系統:包括樣品的提取、純化和反轉錄等步驟。這些操作通常需要在實驗室內進行,以確保樣品的質量和完整性。
PCR反應系統:包括PCR反應試劑、引物和探針等。數字PCR儀支持多種PCR反應類型,如熒光PCR、熒光探針PCR和比色PCR等。
數字PCR芯片:是數字PCR的關鍵部分,用于將樣品稀釋成微小的反應區域。芯片的設計可以根據實驗要求進行調整,通常包括數百到數千個微小反應孔。每個孔中都有可能含有目標序列,通過檢測陽性和陰性信號來確定目標序列的存在與否。
芯片裝載和掃描系統:用于將樣品加載到芯片上,并通過熒光或比色的方式讀取和記錄每個反應孔中的結果。
數據分析軟件:用于解讀和分析數字PCR的結果。這些軟件可以計算每個孔的陽性和陰性信號,并根據稀釋倍數和反應體積等參數計算目標序列的數量。
數字PCR儀的應用廣泛,適用于基因表達分析、突變檢測、病原體檢測、體液檢測、單細胞分析等領域。其高靈敏度和準確性使其成為研究和臨床診斷中的重要工具。然而,數字PCR儀也存在一些局限性,如成本較高、樣品處理復雜等,因此在選擇使用時需要根據具體的實驗需求和經費預算進行評估。